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2007年度安徽省自然科学三等奖: 建立检测人精子细胞染色体畸变和DNA损伤的试验方法

阅读次数:542 作者: 王华 发布时间:2018-03-24
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1. 项目名称:建立检测人精子细胞染色体畸变和DNA损伤的试验方法

2. 奖励等级:2007年度安徽省自然科学三等奖

3. 主要完成人:徐德祥、朱启星、陈远华、王华、孙美芳

摘要

    男性精子染色体畸变(如:性染色体非整倍体畸变)和DNA损伤对人类生殖及其下一代生长发育的影响已引起越来越广泛的重视。精子细胞是间期细胞,在体外不能分裂,因此不能用常规方法检测人精子染色体畸变。过去研究人精子染色体畸变所采用的人精子/金黄地鼠卵融合试验,只能分析能受精的精子细胞的染色体畸变,方法繁琐、每次只能检测数量有限的精子细胞,不适合用于对人群的研究。单细胞凝胶电泳(SCGE)是一种直接在荧光显微镜下用肉眼观察单个细胞DNA链断裂的实验方法,已普遍应用于检测体细胞DNA链断裂,但检测精子DNA完整性过去尚存在技术难题。本课题在安徽省自然科学基金和安徽省教育厅自然科学基金资助下,成功地建立了“荧光原位杂交(FISH)技术检测人精子性染色体非整倍体畸变”、“单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测人精子DNA链断裂”和“高效液相色谱(HPLC)-光电检测技术检测人精子DNA 8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)”等三种实验方法,并开展了下列研究:

(1)采用FISH技术和SCGE技术检测了职业接触丙烯腈对人精子性染色体非整倍体畸变和DNA链损伤的影响,首次发现:职业接触丙烯腈男工精子性染色体非整倍体畸变率和DNA链断裂发生率明显高于非接触人群。

2)用SCGE技术探讨了体外条件下活性氧(ROS)对人精子DNA链完整性的影响,结果发现:外源性和内源性ROS均可引起人精子DNA链断裂,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对外源性ROS引起的精子DNA链断裂有明显的保护作用。

(3)深入研究了非职业人群精液镉、铅和硒浓度与精子质量和精子DNA氧化损伤的关系,首次发现:人精液硒浓度与精子质量呈明显正相关,而与精子DNA 8-OHdG水平呈明显负相关;精液镉和铅浓度与精子质量之间呈明显的负相关,而与精子DNA 8-OHdG水平呈明显正相关

课题如期完成课题计划书的研究内容并达到了预期目标。项目成果发表论文11篇,被包括Nature Reviews Genetics、Human Reproduction、Toxicological Sciences等学术期刊累计引用200余篇次。

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